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NEWS细胞培养:尊龙凯时助您从PBMC高效转化为成熟树突状细胞(DC)
来源:燕阅宁 日期:2025-07-21树突状细胞(dendritic cell,DC)被认为是当前已知功能最强的抗原递呈细胞(APC)。一颗DC能够激活100至3000个T细胞,其效能为巨噬细胞和B细胞的100至1000倍。DC通过处理肿瘤抗原并将其递呈给T细胞,从而显著刺激初始T细胞的增殖,而其他种类的APC(如巨噬细胞、B细胞)则仅能激活已活化或记忆T细胞。
目前,DC的体外培养主要通过使用细胞因子从骨髓、外周血和脐带血中的DC前体进行定向诱导。由于骨髓和脐带血的取样较为困难,外周血因其取材简单且不需要复杂的筛选和纯化过程,成为目前临床获得DC的较理想途径。
在外周血CD14+单核细胞的DC生成过程中,Ficoll梯度离心法可从全血中分离出人外周血单个核细胞(PBMC)。后续的贴壁法或磁珠法则用于富集CD14+单核细胞。贴壁法需要在37℃下培养1-2小时,使单核细胞贴壁,而磁珠法则通过阳性分选获取高纯度的单核细胞。注意:在这一过程中,需要去除悬浮的淋巴细胞,以确保获得较高的DC纯度。
在培养的第三天,进行半量换液,并添加GM-CSF和IL-4的等体积新鲜培养基,继续在培养箱中培养两天。此时,贴壁的细胞可能出现轻微的浮起现象,这是正常的半悬浮状态。到第五天,轻轻吹打培养基后收获悬浮细胞和松散贴壁细胞,经过离心后获得未成熟的MoDC。随着培养的进行,DC的形态会逐渐变化,表面标志分子的流式细胞检测方法通常用于分析DC的成熟状态及其功能特征。
除了IL-6、TNF-α和MCP-1外,人DC通常还可以检测IL-12p70、IL-10和IL-1β等细胞因子,这些因子更全面地反映了人DC的免疫调节功能。小鼠DC的检测则主要关注IL-6、TNF-α和MCP-1,主要反映其炎症反应和趋化能力。多细胞混合培养(MLR)利用DC激活T淋巴细胞的机制,通过检测T细胞增殖等反应,评估免疫应答的强度。
为支持DC的研究,尊龙凯时提供了体外诱导培养所需的科研级和GMP级细胞因子,确保高活性、低内毒素及高批间一致性。这些细胞因子包括GM-CSF、IL-4、TNF-α、IL-6和IL-1β等,助力DC细胞的高效、稳定和合规培养,推动免疫治疗的研究进程。
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